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睿創(chuàng)生物的常用方法及原理免費(fèi)代測(cè)

2023-04-11 [715]

主營(yíng)產(chǎn)品:

天津睿創(chuàng)生物Elisa試劑盒系列

ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISA Kit酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測(cè)試劑盒酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問(wèn)世以來(lái),得到科研工作者的認(rèn)可及推崇,在歐美及中國(guó)獲得很大的推廣,尤其是國(guó)內(nèi)生化領(lǐng)域的長(zhǎng)足發(fā)展。

Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。

可檢測(cè)種屬

(人,小鼠,大鼠,植物,魚(yú),蝦,蟹,牛,羊,狗,貓,微生物,細(xì)胞,土壤等動(dòng)植物)

可以檢測(cè)樣為

(血清,血漿,唾液,尿液,組織,細(xì)胞上清,裂解液等)

產(chǎn)品檢測(cè)目的:

樣本水平表達(dá)(定量檢測(cè),定性檢測(cè),酶活性檢測(cè))

規(guī)格:96T 可以檢測(cè)89個(gè)樣  48T可以檢測(cè)41個(gè)樣

備注:6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)一個(gè)空白對(duì)照

有效期:6個(gè)月 保存2-8°C

elisa試劑盒的優(yōu)點(diǎn):

一、高效、靈敏、特異的抗體;

二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;

三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型;

五、最大限度的節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

常用方法及原理如下:

1. 夾心法:

夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原,一般的操作步驟為:

a. 將具有專(zhuān)一性的抗體固著(coating)于塑膠孔盤(pán)上,完成后洗去多余抗體

b. 加入待測(cè)檢體,檢體中若含有待測(cè)的抗原,則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)

c. 洗去多余待測(cè)檢體,加入另一種對(duì)抗原專(zhuān)一的一次抗體,與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)

d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗體,加入帶有酶的二次抗體,與一次抗體鍵結(jié)

e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理:針對(duì)抗原分子上2個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物。

2. 間接法

間接法常用于檢測(cè)抗體,一般的操作步驟為:

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤(pán)上,完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待測(cè)檢體,檢體中若含有待測(cè)的一次抗體,則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗原進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)。

c. 洗去多余待測(cè)檢體,加入帶有酶的二次抗體,與待測(cè)的一次抗體鍵結(jié)。

d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酶底物使酶呈色,藉儀器(ELISA reader)測(cè)定塑膠盤(pán)中的吸光值(OD值),以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗體的含量。

原理:利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體。

3. 競(jìng)爭(zhēng)法

競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制,一般用于檢測(cè)小分子抗原,天津睿創(chuàng)生物其操作步驟為:

a. 將具有專(zhuān)一性的抗體固著于塑膠孔盤(pán)上,完成后洗去多余抗體

b. 加入待測(cè)檢體,使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)

c. 加入帶有酶的抗原,此抗原也可與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤(pán)上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤(pán)上抗體鍵結(jié),即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來(lái)。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤(pán)內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少,顯色也就越淺。

e. 當(dāng)需要偵測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤(pán)上時(shí),一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

原理:將特異性抗體包被于固相載體表面,經(jīng)洗滌后分成兩組:一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液,另一組只加酶標(biāo)記抗原,經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測(cè)定的未知抗原的量。

天津睿創(chuàng)生物免費(fèi)代測(cè)服務(wù)

天津睿創(chuàng)生物"始終以"提供好的質(zhì)量給客戶(hù),為客戶(hù)的利益服務(wù)"為理念。拓展頂尖的產(chǎn)品研發(fā)與經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)團(tuán)隊(duì),致力于創(chuàng)新產(chǎn)品的研發(fā)。目前,實(shí)驗(yàn)室占地約800平米,內(nèi)設(shè)先進(jìn)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備,能夠完成ELISA檢測(cè)、PCR擴(kuò)增、免疫學(xué)檢測(cè)等各類(lèi)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。天津睿創(chuàng)生物經(jīng)過(guò)10年ELISA試劑盒技術(shù)的積累與沉淀,不斷創(chuàng)新突破,努力將中國(guó)生命科學(xué)研究提升到全新的高度!

凡購(gòu)買(mǎi)本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒,您只需將需要檢測(cè)的動(dòng)物(Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey, Pig……)種類(lèi)和檢測(cè)指標(biāo)(白介素類(lèi)、激素類(lèi))及標(biāo)本數(shù)量(48T/96T)通知公司業(yè)務(wù)員即可。

免費(fèi)代測(cè)服務(wù)樣本要求:
在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè),對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,請(qǐng)?jiān)炷H〔暮?,將?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。代測(cè)放免標(biāo)本的客戶(hù)取材前須向我司銷(xiāo)售人員索要說(shuō)明書(shū),具體操作注意事項(xiàng)請(qǐng)與我司技術(shù)人員溝通。

免費(fèi)代測(cè)服務(wù)液體類(lèi)標(biāo)本:標(biāo)本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。

血 清: 室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

血 漿: 應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

尿液、胸腹水、腦脊液:用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

細(xì)胞培養(yǎng)上清: 檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.0-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

組織標(biāo)本: 切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

天津睿創(chuàng)生物標(biāo)本時(shí)需注明以下情況:
1、標(biāo)本編號(hào)
2、所測(cè)項(xiàng)目
3、是否做復(fù)孔
4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回




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